大腸桿菌測定儀:大腸桿菌檢測新技術(shù)。隨著人們生活水平的提高,食品安全越來越受到重視。在不斷報道的食品安全事件中,大腸桿菌是引發(fā)這些事件的主要影響因素之一,也是判斷食品污染程度的重要參數(shù)。因此,使用快速、可靠、簡單的方法準確檢測食品中大腸桿菌的數(shù)量是否超標非常重要。
大腸桿菌檢測新技術(shù)
氣相色譜和高效液相色譜
氣相色譜主要是對大腸桿菌進行一系列衍生化預(yù)處理后,為后面的分析研究提供盡可能多的化學(xué)成分。大腸桿菌的污染程度可以通過頂空氣相色譜法來分析,其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2來分析微生物。該方法對食品質(zhì)量安全檢測具有重要意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比,該方法具有檢測速度快、靈敏度高的優(yōu)點。高效液相色譜(HPLC)主要根據(jù)離子對反相色譜的原理分析核酸。高效液相色譜法主要針對DN片段的分離。長鏈DN攜帶更多的磷酸基團,因此更多的TE會與之融合,其在柱中的停留時間會增加。因為乙腈是親水性的,DN可以被它分離,在一定的變性溫度下,光譜可以顯示出明顯的吸收峰。該技術(shù)具有精度高、靈敏度高、成本低的優(yōu)點,可以大大提高工作效率。
三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)
三磷酸腺苷生物發(fā)光技術(shù)是近年來發(fā)展迅速的一種微生物快速檢測方法。TP是活細胞中常見的能量代謝產(chǎn)物,為細胞提供各種生理活動所需的能量,其在生物體內(nèi)的含量維持在一定范圍內(nèi)。檢測TP含量的一種方法是熒光分光光度法,生物發(fā)光是熒光素酶催化活細胞的熒光。目前熒光素酶主要來自北美的螢火蟲,相對分子量為6.2萬。它能催化熒光素的氧化反應(yīng)。該反應(yīng)的終產(chǎn)物不穩(wěn)定,并迅速分解產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)的檢測方法相比,不同之處在于檢測結(jié)果可以在幾分鐘內(nèi)獲得,熒光光度計便攜、使用方便,適合現(xiàn)場檢測。這項技術(shù)可用于檢測微小污染物的水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔度。
聚合酶鏈反應(yīng)檢測技術(shù)
PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))早由Kleppe等人于1971年提出,并于1985年被確認為一種檢測方法。PCR檢測技術(shù)是一種聚合酶鏈式反應(yīng),采用變性-退火-延伸三個步驟,使DN基因在體外實現(xiàn)解鏈和解鏈,類似于體外增加和復(fù)制的一種形式。理論上,一個DN分子在2小時內(nèi)可以擴增到106 ~ 109倍,用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物的熒光帶。
目前,聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的許多學(xué)科。在食品微生物檢測領(lǐng)域,聚合酶鏈反應(yīng)可以快速檢測食品中的微生物含量。常用的有免疫聚合酶鏈反應(yīng)、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、多重聚合酶鏈反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和實時定量聚合酶鏈反應(yīng)。史云等人建立了一種檢測肉類和肉制品中大腸桿菌的雙重聚合酶鏈反應(yīng)方法,但該方法需要較長的樣品純化時間,對操作人員的專業(yè)知識要求較高。
生物傳感器檢測技術(shù)
生物傳感器是基于生物化學(xué)傳感技術(shù),以抗體、酶、細胞等為識別元件,結(jié)合信號轉(zhuǎn)換器和電子測量儀器的分析工具。目前成熟的商用傳感器包括免疫傳感器、酶傳感器、DN雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有靈敏度高、選擇性高、穩(wěn)定性好、成本低等優(yōu)點,可以在復(fù)雜系統(tǒng)中快速在線監(jiān)測。目前,用于信號傳輸?shù)姆椒ò暠砻娌▊鬏敗㈦娀瘜W(xué)方法和光傳輸方法。免疫傳感器和基因傳感器主要用于食品微生物檢測。原理是利用DN雜交和抗原抗體反應(yīng)進行檢測,然后轉(zhuǎn)換成光信號或電信號,由儀器放大輸出。生物傳感器分子識別元件的載體可以由各種材料制成,大多數(shù)是光纖和熒光光度計。殷涌光等人利用抗體免疫吸附反應(yīng),利用一級抗體——抗原和二級抗體的夾心法,大大增加了膠體金復(fù)合抗體作為二級抗體的質(zhì)量,延長了膠體金復(fù)合抗體與微生物的結(jié)合過程,放大并穩(wěn)定了信號,從而顯著提高了檢測的準確性。
免疫磁珠技術(shù)
免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。原理是利用磁珠作為抗體載體,將磁珠與大腸桿菌結(jié)合,通過磁力實現(xiàn)機械運動來分離大腸桿菌。與其他細菌分離方法相比,免疫磁珠技術(shù)大大提高了樣品中致病性副溶血弧菌的檢測效率。免疫磁珠技術(shù)可以快速處理不同菌株樣品中的不同微生物,這種方法可以大大提高檢測效率。